细胞裂解液:0.1%-1%(需验证对目标蛋白的兼容性)。
封闭液/稀释液:0.05%-0.5%。
核酸提取:0.5%-2%(与蛋白酶K联用)。
酶促反应体系:0.01%-0.1%(避免抑制酶活性)。
溶解方法
直接溶解:室温下搅拌溶于水或缓冲液,必要时加热至40-50℃加速溶解。
预混储存:建议配制10%-20%储备液,避免长期储存分层。
注意事项
密封避光保存于阴凉干燥处(建议15-25℃),避免高温或光照导致降解。
长期储存可能分层,使用前需摇匀。
温度敏感性:高温(>60℃)可能破坏乳化性能,建议低温配制。
氧化风险:避免与强氧化剂(如高浓度过硫酸盐)直接混合。
塑料容器:长期接触可能溶胀聚苯乙烯(PS)或聚碳酸酯(PC),建议短期使用或改用玻璃容器。
蛋白干扰:过量可能吸附抗体或抗原,需通过预实验优化浓度。
配伍禁忌
阳离子表面活性剂:可能因电荷中和导致沉淀,需避免复配。
高盐体系:可能降低乳化效率,需调整浓度或添加稳定剂。
常见问题
Q:为何IGEPAL CA-210适用于病毒裂解液?
A:其非离子特性可温和破坏病毒包膜释放抗原,同时保留抗原免疫原性,避免假阴性结果。
Q:使用后出现乳白色浑浊是否正常?
A:可能是乳化不完全或体系pH突变导致,需检查溶解条件或调整缓冲液pH至中性。
Q:能否替代Triton X-100用于细胞通透?
A:可以,但需验证浓度(通常IGEPAL CA-210所需浓度更低),且对某些膜蛋白的提取效率可能不同。
Q:对荧光检测是否有干扰?
A:低浓度(<0.1%)无显著影响,但高浓度可能因成膜性导致光散射干扰,需优化用量。
Q:是否适用于含血清样本?
A:需验证,因血清中脂蛋白可能与其竞争乳化,建议添加额外稳定剂(如BSA)。