使用范围
TMB-HCl显色液(如ELISA终止液)、化学发光底物系统、微孔板预处理液。
生物素/亲和素标记体系:增强偶联效率。
注意事项
储存条件密封避光保存,避免水分和乙醇挥发导致凝胶化(若已凝胶,需添加1%-2%乙醇复溶)。
推荐容器材质:不锈钢、铝或玻璃内衬(避免塑料长期接触)。
pH范围:仅在酸性/中性条件下使用(pH ≤ 7),强碱性环境会使其分解失效。
温度适应性:冻融不影响活性,但使用前需充分搅拌均匀。
避免与强氧化剂(如高浓度H₂O₂)直接混合,可能引发络合物解离。
在含蛋白的体系(如血清样本)中需验证是否影响抗体结合活性。
常见问题
Q:为何Aerosol OT能延长TMB显色时间?
A:通过形成稳定络合物,抑制TMB向不可逆氧化产物的转化,维持其处于高氧化态。
Q:使用后出现蓝色沉淀如何处理?
A:可能是过量Aerosol OT或pH偏高导致络合物析出,需优化浓度或调整体系pH至酸性。
Q:能否直接替代其他表面活性剂(如Triton X-100)?
A:需实验验证,因Aerosol OT功能侧重于TMB稳定和低发泡,可能与Triton的增溶作用存在差异。
Q:对检测灵敏度是否有影响?
A:合理添加可提升信号稳定性,但过量可能干扰抗体结合,建议通过预实验确定最佳浓度(通常0.1%-0.5%)。
Q:是否适用于荧光检测体系?
A:需结合具体荧光底物验证,因其可能增强有机溶剂溶解性,但对荧光信号本身无直接影响。
参考用量
ELISA显色液 0.1%-0.3% 终止反应后添加
化学发光底物 0.05%-0.2% 预混至发光体系中
微孔板预处理 0.01%-0.05% 涂布前润湿表面