标记工艺流程
1.取100µL 的羧基荧光微球溶液,加入 500µL MES PH6.0 缓冲液洗一次,离心去上清;
2.加入500µL MES PH6.0 缓冲液复溶微球,之后加入 30µL EDC 和 90µL NHS (浓度均为 3mg/mL, MES PH6.0 缓冲液现用现配)于黑暗中旋转震荡 30min,离心去上清;
3.加入 500µL MES PH6.5 缓冲液洗一次,加入 500µL MES PH6.5 缓冲液复溶微球,加入 20µg 抗体(抗体用量根据项目具体情况变化) 于黑暗中旋转震荡 2h,离心去上清;
4.加入 500µL 封闭液复溶,于黑暗中旋转震荡 1h,离心去上清;
5.加入 500µL 保存液洗一次,离心去上清;
6.加入 100µL 保存液复溶并于 2-8℃保存。
注: 离心转速推荐 15000rpm(22000xg), 离心时间 15-20min。
使用注意事项
1.羧基荧光微球在使用之前应涡旋混匀或超声混匀,探入式超声是重悬微球最有效方式。
2.EDC 溶液使用应现用现配,NHS也应现用现配。
3.偶联反应缓冲液体系中应不含游离氨基,尤其 Tris、甘氨酸、醋酸缓冲液不可使用。
4.反应缓冲液体系中加入痕量表面活性剂(不超过 0.01%)可有效避免微球的团聚。
5.微球溶液浓度可根据项目信号值进行调整,T 线标记微球推荐用量为 3%~8%; C 线标记微球推荐用量为 1%~2%。
6.垫材质、垫预处理缓冲液、微球稀释液、活化剂用量和抗体比例等可根据项目性能进行优化;
本方案仅供研究初期参考,具体实验条件请研究人员依据自身项目进行优化。