操作流程
1.高脂样本处理(以化学发光检测为例)
一步法:
试剂配制:将高脂样品处理剂(0.5%-2% w/w)与PEG6000(3%-10% w/w)溶于去离子水,加热至40℃搅拌至透明。
样本混合:按1:3-1:5比例将处理液与血清样本混合,涡旋振荡5分钟。
离心分离:3000rpm离心10分钟,取上清液用于检测。
两步法:
a.向高脂样本(如血清)中加入高脂样品处理剂溶液,终浓度为0.5%-1%(例如:1ml样本中加入5-10μl 高脂样品处理剂原液)。
混合后于37℃孵育10分钟,促进脂质颗粒乳化分散。
随后以12,000 rpm离心10分钟,去除大颗粒脂蛋白复合物,收集下层清液。
b.将高脂样品处理剂预处理后的清液与20% PEG 6000溶液按1:1体积比混合(例如:100μl样本+100μl PEG溶液)。
室温静置30分钟,促使脂蛋白沉淀。以12,000 rpm离心20分钟,取上清液进行检测。
中低血脂水样本可用一步法,极高脂样本可用两步法。
注意事项:需验证高脂样品处理剂与目标抗原/抗体的相容性,避免因表面活性剂包裹导致信号抑制。
2.免疫层析试纸条制备
胶体金标记优化:将高脂样品处理剂(0.5%-1.5% w/w)加入胶体金标记缓冲液,防止标记物聚集并提高标记效率。
反应体系控制:高脂样品处理剂与Tween-20复配可调节硝酸纤维素膜(NC膜)的润湿性,优化层析速度和检测灵敏度。
应用效果
1.提升检测准确性
化学发光检测:高脂样品处理剂处理后的乳糜血清样本,脂质清除率可达85%-90%,信噪比提升至1:12(未处理样本信噪比仅1:8)。
免疫比浊法:在C反应蛋白(CRP)检测中,高脂样品处理剂可降低脂血样本的假阳性率约20%。
2.增强试剂稳定性
开瓶稳定性:含高脂样品处理剂的试剂在开瓶后(4℃保存)可维持72小时内性能稳定,避免果冻化或沉淀。
抗冻融性能:高脂样品处理剂与甘油复配可提升试剂的低温耐受性,-20℃冻融3次后活性损失≤5%。
3.成本与效率优势
自动化适配:高脂样品处理剂的低温流动性支持全自动化学发光分析仪的连续进样,减少人工干预。
注意事项与局限性
1.配伍性验证:需避免高脂样品处理剂与强酸性/碱性试剂(如EDTA、SDS)直接混合,需先稀释,否则可能引发沉淀或信号抑制;
2.PH敏感性:pH<6.5时高脂样品处理剂可能析出,需严格调节缓冲体系。
应用场景推荐
1.优先使用高脂样品处理剂的场景:
常规检测:如血脂、CRP等化学发光或比浊项目。
中低灵敏度平台:对成本敏感且样本脂质干扰中等的实验室。
2.慎用场景:含高浓度胆红素(>50μmol/L)或血红蛋白(>5g/L)的样本,需额外添加抗干扰剂(如亚铁氰化钾)。