一、化学发光平台中的应用
适用体系:更适用于碱性磷酸酶(ALP)标记的酶促化学发光体系,如AMPPD、APS-5、CDP-Star等底物系统。
作用机制:通过稳定胶束结构,促进ALP催化底物分解产生的激发态中间体释放光子,延长发光持续时间(达30-60分钟)。
典型效果:在ALP-AMPPD体系中,0.01-0.03% AO-2可提升灵敏度至10^-18 mol/L,适用于低丰度生物标志物检测(如肿瘤标志物CA125)。
用量:0.01-0.03%(w/v),高浓度可能抑制ALP活性(活性损失率>20%)。
注意事项:需控制pH在8.0-8.5,避免阳离子化导致静电聚集;避免高温保存(>37℃会加速酶失活)。
二、免疫比浊平台中的应用
适用体系:更适合高离子强度环境(如含血浆样本)的浊度检测,通过抗静电作用维持复合物分散性。
效果:在C反应蛋白(CRP)检测中,0.02% AO-2可降低脂血样本的假阳性率(降幅达40%)。
用量:0.01-0.03%(w/v),需避免与阳离子表面活性剂(如CTAB)复配。
注意事项:在pH 7.4缓冲液中稳定性最佳,需通过DLS监控复合物粒径(目标范围50-200 nm)。
三、免疫层析平台中的应用
适用体系:荧光微球层析试纸条中,作为探针保护剂,增强荧光信号稳定性。
用量:0.02-0.05%(w/v),需配合Triton X-100(0.1%)增强穿透性。
注意事项:需验证AO-2对荧光探针猝灭效应(建议通过荧光寿命检测)。
四、不同发光物质的选择建议
直接化学发光(吖啶酯):AO-1 + 异鲁米诺;快速检测(如急诊心肌标志物);发光快(10秒内达峰),适合POCT
酶促化学发光(ALP):AO-2 + AMPPD/APS-5;高灵敏度检测(如肿瘤标志物);长发光时间(30-60分钟),适合实验室
电化学发光(三联吡啶钌):AO-1 + TPA;高通量自动化检测(如全自动化学发光仪);灵敏度最高(10^-20 mol/L),抗干扰强